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人牙周膜细胞在双氧水处理后纯钛表面的活性>>lunwen.5151doc

人牙周膜细胞在双氧水处理后纯钛表面的活性
作者:未知 文章来源:网络 点击数: 更新时间:2010-2-10

                     作者:侯豫,王永,张丽,吴承龙

【关键词】  牙周膜; 细胞培养; 钛; 碱性磷酸酶; 人牙周膜细胞; 双氧水

  [Abstract] Objective: To investigate the application possibility of hydrogen peroxide pre-treated titanium in oral clinic. Methods: The proliferation and alkaline phosphatase (ALP) activity of human periodontal ligament (hPDL) cells attached on titanium with four kinds of surface (smooth, rough, etched, hydrogen peroxide treated)were detected. The growth of primary and passaging cells was observed with invert microscope, and the morphology of cells was observed with scanning electronic microscope (SEM); ALP activity was tested with enzyme-linked immunosorbant assay. The morphology, immunohistochemistry features, proliferation and ALP acyivity of cells on the four kinds of titanium were compared. Results: The hPDL cells could grow and proliferate on four kinds of titanium. The cell proliferation on titanium treated by hydrogen peroxide was better than those in the other three groups(P<0.05). Conclusion: Titanium treated by hydrogen peroxide is more beneficial to attachment and proliferation of the cells than titanium processed by the other three ways. Cells in the four groups all showed ALP activity, and among them, the activity in cells of hydrogen peroxide treated group is the highest(P<0.05).

  [Key words] periodontal ligament; cells culture; titantium; alkaline phosphatase; human periodontal ligament cells; hydrogen peroxide

  种植体以其有效的支持、良好的咀嚼功能、方便的清洁和护理被广泛应用于口腔临床治疗中。理想的种植体要求种植体-软组织界面有类似天然牙上皮附着的结构,形成紧密的上皮“袖口”,成为一种功能性生物屏障。它有保护种植体在复杂的口腔环境中免受细菌及其他致炎因子侵入而保持长期稳定的作用。近代牙周病学已证明:牙周组织再生的细胞学基础是牙周膜细胞,而牙周膜细胞是牙周膜中最多、功能上也是最重要的细胞[1]。它是种植体-软组织界面中的重要组成部分,研究发现其具有一定的异质性既有成纤维细胞的特性,又有成骨细胞的特性,如:具有较高的碱性磷酸酶(ALP)活性、能合成和分泌大量的胶原和非胶原蛋白等[2]。钛金属以其良好的生物活性被作为首选的种植体材料并广泛应用于临床,但其初期的稳定性及长期的成功率仍不能让人满意[3]。为此,采用体外培养人牙周膜细胞(hPDL)的方法对其在经过4种不同处理的钛片上的生长、增殖及活性进行检测。

  1  材料与方法

  1.1 实验器械

  钛片(宝鸡科迪普有色金属加工有限公司),扫描电镜(S-3400N,日本日立公司),倒置显微镜(XD-101型,南京江南电股份有限公司;超净工作台(苏州净化设备公司),离心机(TDL-40型,上海安亭科学仪器厂);酶标光度仪(Bio-Tek E1312E,USA),细胞计数板(浙江省玉环县求精医用仪器厂)。

  1.2 实验材料

  α-MEM培养基(海克隆生物化学制品有限公司),胎牛血请(杭州四季青公司),胰蛋白酶、Ⅰ型胶原酶(美国Sigma公司),二甲基亚砜(DMSO,捷瑞生物工程有限公司),MTT试剂盒(凯基生物科技发展有限公司,KeyGen),ALP检测试剂盒(南京建成公司),波形丝蛋白抗体、角蛋白抗体、免疫组织化学试剂盒(武汉博士得公司)。

  1.3  实验步骤

  1.3.1  钛片的处理 

  光滑组与粗化组钛片由西安宝鸡科迪普有色金属加工有限公司制备提供。具体方法如下:用直径10 mm纯钛棒线切割加工成厚1 mm的圆钛片,以金相砂逐级打磨至1 200目,直至表面平滑、呈现灰白的金属色为止,然后用丙酮、75%乙醇和去离子水在超声清洗器(KQ250)轮流清洗15 min,以除去材料表面机械加工而残留的油污,40 ℃烤箱烘干,即得到光滑组钛片。再以40目金刚砂喷光滑钛片的表面,每试样30片﹙样本表面呈均一灰色﹚,进行上述同样的超声清洗后,40 ℃烤箱烘干,得到粗化组钛片。钛片的分组:钛片经以上处理后分为4组:光滑组、粗化组、酸蚀组(同粗化组处理后用5.8 mol/L HCl和8.96 mol/L H2SO4混合液处理10 min,双蒸水冲洗,50%干燥)及双氧水组(同酸蚀组处理后,8.8 mol/LH2O280 ℃处理30 min,400 ℃热处理1 h)。

  1.3.2 人牙周膜细胞﹙Human Periodontal Cells hPDL﹚的原代培养及传代 

  (1)组织来源:正畸需拔除的11~17岁青少年的双尖牙(A、B、C、D四区均可),无炎症、无龋坏的正常牙齿(贵

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